細胞表面的蛋白質(zhì)通常是糖基化的，這有利于改善蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)和溶解性，并調(diào)節(jié)其功能。對于具有細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)，可直接參與或進行多聚化并觸發(fā)信號級聯(lián)。這些事件也可以通過蛋白糖鏈的參與來啟動，已有報告顯示植物和真菌凝集素會對細胞行為具有顯著的影響。Peter Nowell在1960年發(fā)現(xiàn)凝集素PHA可以促使白細胞增殖，從而首-次實現(xiàn)了這種類型細胞的體外擴增。其他凝集素如Con A可促使T細胞活化并增強細胞對其他生長信號的敏感性(Ref.77-79) 。在一項關(guān)于T細胞對G-CSF反應(yīng)的研究中，Nawa等人使用Con A刺激的CD3＋細胞來測量增殖和細胞因子的產(chǎn)生(Ref.6)。

凝集素并非普遍具有促進細胞有絲分裂的活性，促進白細胞生長的凝集素也能引起其他細胞如CHO細胞的死亡。Stanley等人的這一觀察結(jié)果促使他們開發(fā)出更多的突變細胞系，并提出了一種通過凝集素細胞毒性確定細胞表面糖基化的新型檢測方法(Ref.46)。癌細胞表面異常的糖基化，促使研究人員考慮是否可以將具有細胞毒性的植物凝集素用作抗腫瘤分子(Ref.53、80)。Hassan等人對蘑菇來源的凝集素的抗腫瘤和促有絲分裂活性也進行了簡要綜述（Ref.81）。

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 精選文獻 

• Lymphocyte proliferation and response to stimulation (Refs. 6, 7, and 109)

• Cell cytotoxicity (Ref. 46)

• Modulate cell growth and apoptosis in vivo with animal models (Ref. 48)

• Antitumor agent during in vitro and in vivo models (Ref. 53)

• Support growth of human pluripotent stem cells without differentiation (Ref. 56)

• Probing lymphocyte behavior from animal models (Ref. 103)

 實驗流程概覽 

T細胞增殖

培養(yǎng)：

對于培養(yǎng)的人源T細胞，在完-全生長培養(yǎng)基中加入一定濃度(如5-50ug/ml)的PHA-L或Con A進行培養(yǎng)，以促進T細胞的增殖和活化；最佳濃度最終應(yīng)由用戶確定。

Note：Con A 和 PHA-L 是選擇性促有絲分裂原，不具有普遍的促生長或增殖活性。這里提供的實驗概覽是使用這些已驗證的凝集素建立的促有絲分裂增殖模型。使用已知模型系統(tǒng)作為對照，為深入了解不同凝集素和化合物對不同類型哺乳動物細胞(上述細胞類型除外)的促有絲分裂活性提供了參照。

評估：

根據(jù)研究的定量要求，可通過以下幾種方法評估促有絲分裂的效果。顯微鏡下觀察細胞表型變化、比色法測定細胞酶活性，是傳統(tǒng)上用于半定量分析的方法。使用流式細胞儀來評估蛋白質(zhì)或 DNA的合成和有絲分裂可以實現(xiàn)更有效的定量。

細胞毒性

檢測

對于培養(yǎng)的細胞，該方法相當(dāng)簡單，即將不同濃度特定的凝集素添加到培養(yǎng)基中，并在多個時間點進行評估。建立一個已知的針對特定細胞系的凝集素毒性模型系統(tǒng)，有助于簡化檢測未知凝集素與細胞相互作用的實驗流程。Stanley的論文(Ref.46)提供了建立這種模型系統(tǒng)的詳細方案。作者在他們的研究中使用了 Con A 和 PHA-L 凝集素，因為這些凝集素對 CHO 細胞具有已知的毒性。

評估

在Stanley(Ref.46)這篇凝集素抗性類型檢測概述中，通過對剩余活細胞群染色或測定細胞酶活性來衡量毒性。根據(jù)實驗的不同具體需求，也可以采用其他方案，例如使用特定標(biāo)記物結(jié)合相應(yīng)檢測平臺，來檢測細胞死亡或凋亡。

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